Svara zudums downingown pa.

Dienas braucamspēja Pelēm tika veikts genotips ar PCR. Ņemiet vērā šūnu klātbūtni, kas iekrāsoti insulīnam un glikagonam, e un f bultiņu galviņas. Fd attēls , nepiesārņots ST-II slānis 5.

Trofoblastu sincitializācijai ir nepieciešams proproteīna konvertāzes furīns

Lai noteiktu iespējamo terapeitisko lietderību rekombinanto adeno saistītu vīrusu rAAV agrīnās gēnu terapijas intervencēs, mēs veicām visaptverošu četru centrālās nervu sistēmas CNS ievadīto rAAV serotipu transdukcijas un bioloģiskās sadalīšanās profilu novērtējumu, -5, -8, -9 un -rh Mēs novērojām būtiskas atšķirības bioloģiskās izplatības un transdukcijas profilos starp serotipiem, un tas atšķiras MPS IIIB, salīdzinot ar veselām kontroles pelēm.

Kopumā kontroles pelēm visas serotipi tika veikti salīdzinoši, lai gan dažās fokusa zonās novēroja dažas atšķirības. Jāatzīmē, ka bioloģiskās izplatības modelis CNS ir atšķirīgs atkarībā no serotipa un genotipa.

Interesanti, ka AAV8 ražoja arī augstāko zaļo fluorescējošo proteīnu intensitātes līmeni, salīdzinot ar jebkuru citu serotipu, un parādīja uzlabotu transdukciju NAGLU, salīdzinot ar kontroles smadzenēm. Klīniskās pazīmes ir hiperaktivitāte, sociālās mijiedarbības zudums un progresējoša garīgā deģenerācija, kas galu galā izraisa smagu neirokognitīvo spēju un motora funkcijas zudumu.

kādi rieksti palīdz svara zudumā

Labi raksturotais MPS IIIB peles modelis tika izmantots terapeitisko iejaukšanās testēšanai un tam piemīt daudzas tādas pašas bioķīmiskās, histoloģiskās un klīniskās iezīmes kā cilvēka slimībai.

Gēnu terapijai ir liels potenciāls lizosomu uzglabāšanas slimību ārstēšanai; tomēr plaši izplatītā gēnu piegāde visā centrālajā nervu sistēmā CNS joprojām ir galvenais uzdevums, jo nepieciešams pārvarēt asins smadzeņu barjeru. Rekombinantā adeno saistītā vīrusa AAV vektora sistēma ir bijusi labvēlīgs gēnu piegādes līdzeklis, un tas ir izrādījies ļoti efektīvs post-mitotisko šūnu transducēšanā dažādos audos, tostarp CNS.

Turklāt cilvēkiem ar AAV nav saistīta nozīmīga patogenēzija. RAAV vīrusu vektoru tieša ievadīšana smadzeņu parenchimā var palīdzēt apiet asins smadzeņu barjeru, tādējādi ļaujot mērķtiecīgu neironu šūnu transdukciju. Patiešām, veiksmīga AAV-mediēta gēnu terapija ir pierādīta MPS modeļos, 5, 6, 7, 8, 9, kas izraisīja uzlabojumus neiropatoloģijā, uzvedībā un palielinājās dzīves ilgums. Tomēr novēro atšķirīgas atbildes, pamatojoties uz AAV serotipu, kas tiek ievadīts, un vecumu vektora ievadīšanas laikā.

Tādējādi neironu šūnu tropismu var noteikt Pseudotipizējošie AAV vektori ar dažādu serotipu kapsulu proteīniem. Tāpēc salīdzinājām transdukcijas modeļus pēc centrālās nervu sistēmas iekšējās parenhīmas injekcijas strauji augošajā jaundzimušo peles smadzenēs, lai noteiktu, kurš serotips dod visizdevīgāko rezultātu transdukcijas un bioloģiskās sadalīšanās modeļos.

Palielināta Salu Apoptoze Pdx1 +/– Pelēm

Mēs paredzam, ka šie rezultāti palīdzēs svara zudums downingown pa pieejas noteikšanā, nosakot visefektīvāko gēnu terapijas vektoru no MPS IIIB atkarīgas vecuma ārstēšanas. Rezultāti Serotipu un genotipu atkarīgas vispārējās rAAV-zaļās fluorescējošās olbaltumvielu sadalīšanās un ekspresijas atšķirības Tā kā plaši izplatītā vektora bioloģiskā sadalīšanās veicinās globālo CNS transdukciju, svara zudums downingown pa vispirms centāmies novērtēt un kvantitatīvi noteikt kopējo rAAV-zaļo fluorescējošo proteīnu GFP sadalījumu CNS pēc intrakraniālās sešu vietu vektora piegādes 1.

Trīs mēnešus pēc AAV5, -8, -9 un -rh10 injekcijas tika atlasīti četri telpiski atšķirīgi un relatīvi vienlīdzīgi laukumi GFP ekspresijas kvantitatīvai novērtēšanai. Abās grupās visi eksponētie vektori izplatījās katrā no četrām pētītajām audu sekcijām, AAV8 un mazākā mērā -9, pārsvarā. Kontroles kohortā ntu novājēšanu plāksteris sasniegta statistiski nozīmīga atšķirība, kas dod priekšroku jebkuram serotipam starp sekcijām 1.

Šī nozīmīgā AAV8 ekspresijas atšķirība var liecināt par atšķirībām regulatīvajos mehānismos, kas modulē AAV8 transdukciju starp šiem diviem genotipiem. Šie novērojumi liecina, ka AAV vektoru sadalīšanās svara zudums downingown pa lokalizācijas preferences var modulēt subjekta veselības un ekstracelulārās vides sastāvā.

Pēc sešu vietnes virzītu vektoru ievadīšanas a interesējošās reprezentatīvās audu sekcijas b tika analizētas procentos no laukuma ar GFP ekspresiju. Dati atspoguļoti kā vidēji ± sem Pilna izmēra attēls Genotipu raksturojoši bioloģiskās sadalīšanās modeļi vidus sagitālā garozā, hipokampā, talamā un smadzenēs Ņemot vērā unikālās funkcijas, kas attiecināmas uz atsevišķām smadzeņu strukturālajām zonām, mēs vēl centāmies novērtēt atšķirības AAV-GFP lokalizācijā vidū sagitālā smadzeņu sekcijās.

Ievērojamas jomas ir garoza un mazākā mērā hipokamps un talams. Visus serotipus smadzeņu pārnešana bija minimāla.

Leah Williams vecums un dzimšanas diena

Kontroles dzīvnieki uzrāda līdzīgus krāsošanas veidus garozā, bet bija mazāks kopējais vektora bioloģiskais sadalījums un bija ievērojamas atšķirības GFP ekspresijā zemākā un augstākā koliculā 2a. Vidēja sagitāla AAV serotipu atkarīga reģionālā bioloģiskā sadalīšanās. AAV5 paneļu ieliktņi atspoguļo transducētās ependimālās šūnas pie × 20 palielinājuma a.

g5 novājēšanas masāža

Visas sagittālās sekcijas tika skenētas ar palielinājumu × 20, un GFP ekspresija tika kvantitatīva, izmantojot Aperio ImageScope algoritmu. Dati atspoguļoti kā vidēji ± sem Pilna izmēra attēls Tā kā garozai, hipokampam, talamam un smadzenēm ir svarīga loma domāšanas, atmiņas, signālu releja un motora koordinācijā, mēs centāmies kvantitatīvi noteikt GFP pārpilnību AAV serotipa rezultātā katrā no šiem konkrētajiem reģioniem vidus sagitālā šķēle 2.

Kontroles grupā AAV8 parādīja lielāku ekspresijas laukumu gan garozā, gan hipokampā 2. Tā kā mēs arī novērojām kvalitatīvas GFP ekspresijas atšķirības, pamatojoties uz serotipu, mēs veicām GFP intensitātes kvantitatīvu novērtējumu, izmantojot infrasarkano staru analīzi, izmantojot Odyssey instrumentu.

Šīs sistēmas izmantošanas priekšrocība ir tā, ka tā nodrošina lielāku jutību un precīzāku gan spēcīgu, gan vāju signālu atklāšanu plašākā lineārā dinamikas diapazonā.

AAV5 un -rh10 bija salīdzinoši zemākas. GFP intensitāte katras dzīvnieka garozā, hipokampā, talamā un smadzenēs tika summēta.

Kopsavilkums

Transducēto šūnu fenotipu vidējo sagitālo sekciju garozā noteica, pamatojoties uz GFP klātbūtni, kas bija lokalizēta ar šūnu specifiskiem marķieriem 4.

Visi serotipi transducēja gan astrocītus, gan neironus, bet ne mikrogliju vai oligodendrocītus. Jāatzīmē, ka dati liecina, ka GFP izpausmes stabilitāte astrocītos un neironos atšķiras ar serotipu. Lai gan gan AAV5, gan svara zudums downingown pa transducēja astrocītus un neironus, transdukcijas noturība bija ievērojami mazāka, īpaši AAV5, salīdzinot ar -8 un Kopumā šie dati atspoguļo selektīvo atšķirību šūnu tipa specifiskajā transdukcijā, iespējams, diferencētas receptoru ekspresijas rezultātā.

Visi AAV serotipi transduc neironus un astrocītus, bet ne mikrogliju un oligodendrocītus garozā. Transducētās šūnas tika novērtētas, izmantojot pozitīvo pikseļu skaita FL v1 algoritmu ImageScope ietvaros. Visi attēli tika analizēti vienā un tajā pašā ekspozīcijā.

Mūsu dati parādīja, ka GFP ekspresijas stabilitāte starp neironiem un astrocītiem ir atkarīga no serotipiem. Interesanti, ka mēs redzējām, ka AAV8, -9 un mazākā mērā -rh10 spēcīgi transducēja sirds miocītus un aknas.

eļļa sadedz taukus

Muskuļu, nieru un liesas audu transdukcija netika novērota nevienam serotipam 6. Pilna izmēra attēls Diskusija Šajā pētījumā mēs vispusīgi pārbaudījām četrus AAV serotipus MPS IIIB peles smadzenēs, lai novērtētu tropismu un transdukcijas rezultātus pēc jaundzimušo intrakraniālās sešu vietņu vektoru piegādes.

Daudzu neiroloģisku slimību, tostarp MPS III, ārstēšana zīdaiņa laikā būs nepieciešama, lai novērstu neatgriezenisku smadzeņu traumu. Tā kā injekcijas laiks ir izšķirošs, mēs izvēlējāmies injicēt pēcdzemdību dienā 3, lai atvieglotu vektora bioloģisko sadalīšanos smadzenēs.

Priekšmeti

Katrs no četriem vektora serotipiem, kas izmantoti šajā pētījumā, tika konstruēts ar humanizētu zaļo fluorescējošo proteīnu kaseti, ko vada vistas beta-aktīna promotors un citomegalovīrusa pastiprinātāju elementi, kas tika apzīmēti ar AAV2 invertētajiem termināļiem. Tāpēc jebkuras atšķirības bioloģiskajā sadalījumā, transdukcijā un GFP intensitātē ir tieši attiecināmas uz kapsidas aminoskābju sastāva izmaiņām un attiecīgajām atšķirībām receptoru tropismā katram serotipam.

AAV8 ir identificēts kopreceptors, svara zudums downingown pa ne primārais receptors. AAVrh10 nav aprakstīti ne primārie, ne līdzceptori. Ir sagaidāms, ka AAVrh10 kapsīda struktūras un receptoru afinitātes atšķirībām ir arī centrālā loma tās šūnu mijiedarbības modulācijā.

Mūsu slimības modelī tika novērotas katras rAAV bioloģiskās izplatības un transdukcijas profila serotipu un genotipa atkarības. Mēs arī novērojām atšķirības dažādu serotipu bioloģiskās izplatības tendencēs. Jo īpaši, izņemot AAV8, tendence liecina, ka visos citos serotipos GFP izpausmes samazinās no sānu līdz mediālām sekcijām.

Tika konstatēts, ka šī atšķirība ir saistīta ar palielināto sialskābes līmeni MPS VII smadzenēs, kas traucē AAV9 transdukciju, 27 atkal veicot faktoru, kas saistīti ar slimības patofizioloģiju, mijiedarbību AAV aktivitātes modulācijā.

  • Kā sadedzināt tauku kaklu
  • Lai noteiktu iespējamo terapeitisko lietderību rekombinanto adeno saistītu vīrusu rAAV agrīnās gēnu terapijas intervencēs, mēs veicām visaptverošu četru centrālās nervu sistēmas CNS ievadīto rAAV serotipu transdukcijas un bioloģiskās sadalīšanās profilu novērtējumu, -5, -8, -9 un -rh

Lai gan mēs nevaram izslēgt nelielas atšķirības injekcijas vietas variācijās, mēs uzzinājām, ka vairuma serotipu izplatība, izņemot AAV8 MPS IIIB grupā, bija nedaudz ierobežota diapazonā, galvenokārt lokalizējot garozā, ar nelielu tirdzniecību ar hipokampu un talamu.

Mēs novērojām arī spēcīgu GFP transdukciju ar AAV8 ārstētiem dzīvniekiem, salīdzinot ar kontroli, lai gan šī atšķirība nebija acīmredzama citos serotipos. Interesanti, ka AAV5, bet ne -8, -9 vai -rh10, demonstrēja spēcīgu ependimālo šūnu transdukciju, bet sliktu transdukciju citos reģionos. Līdzīgas tropisma preferences ependimālām šūnām AAV9 novēroja pēc intratekālas ievadīšanas ne-cilvēka primāta modelī.

Lai gan šajos pētījumos tika izmantotas dažādas injekcijas vietas, novērojumi apstiprina viedokli, ka, novērtējot terapeitisko potenciālu, var būt nepieciešama AAV sugas specifiska analīze.

Leah Williams Wiki, biogrāfija, vecums, augstums, QVC tīkls, vīrs, neto vērtība, svara zudums

Šīs efektivitātes atšķirības var izskaidrot kā tropisma preferenču un receptoru pieejamības, diferenciālas jutības pret proteazēm vai citiem nenoteiktiem faktoriem sekām.

Jāatzīmē, ka nav bijis būtisks smadzeņu transdukcija ar kādu serotipu 2. Mēs pārbaudījām vispārējo GFP ražošanas intensitātes līmeņu atšķirību, pamatojoties uz AAV serotipu specifiskajos vidus sagitālās smadzeņu reģionos.

svara zudums neēd brokastis

Šie dati liecina, ka AAV8 ir paaugstināta šūnu transdukcijas efektivitāte un intracelulārā tirdzniecība, salīdzinot ar tās kolēģiem, kā rezultātā uzlabojas olbaltumvielu ražošana 3.

Lai tālāk izprastu šo serotipu tropisma preferences MPS IIIB smadzenēs, mēs analizējām astrocītus, mikrogliju, neironus un oligodendrocītus. Mēs novērojām, ka visi serotipi transducē neironus un astrocītus, lai gan dažādos līmeņos, bet ne serotipu transducētu mikrogliju vai oligodendrocītu 4.

Tā kā mikroglijs CNS ir lielā apgrozībā, ilgstoša gēnu ekspresija var būt traucēta. Alternatīvi, šie vīrusi var vienkārši nespēt pārvērst šos svara zudums downingown pa šūnu veidus labi. Iepriekšējie pētījumi ir parādījuši, ka mikrogliju ekspresija tika panākta tikai ar specializētiem promotoriem, kas liecina, ka mikrogliju GFP ekspresijas trūkums var būt neefektīvas transkripcijas sekas, ko rada mikroglifu mašīna.

Mēs novērojām serotipu atkarīgas šūnu tropisma preferences. Šādas specifiskas šūnu tipa preferences var attiecināt uz AAV vektoru šūnu virsmas receptoru ekspresijas atšķirībām, bet zema astrocitiskā transdukcija var būt gēnu izzušanas rezultātā radušās zaudētās sekas, kas ir MPS IIIB pazīme, ko dēvē par astrogliozi. Tas arī liek domāt, ka katram slimības stāvoklim tropisms varētu būt citādi ietekmēts.

Smadzenēs dažus serotipus transducēja dažas purkinje šūnas, kas, iespējams, liecināja par vispārēju zemu AAV specifisku receptoru pārpilnību šajā agrīnā laika posmā.

d4 tauku deglis

Var spekulēt, ka heparāna sulfāta vai, iespējams, citu šūnu komponentu, kas atrodami augstā līmenī, piemēram, gangliozīdi, pārpalikums MPS IIIB šūnu vidē var būt atbildīgs par vektoru bioloģiskās izplatības diferencēšanu.

Līdzīgi visi vektoru krājumi tika ražoti ar to pašu vektora kodolu un koncentrācijas, kas noteiktas ar to pašu metodi. Jebkura CNS slimība, kas maina ekstracelulāro kodolu sastāvdaļu izplatību, var mainīt parasto vektora izplatību un efektivitāti.

Lija Viljamsa biogrāfija un Wiki

Tas padara slimību specifiku un patiešām sugu specifiskus novērtējumus šiem vektoriem ļoti svarīgi klīniskajai attīstībai. RAAV serotipu diferenciālā kapacitāte, lai transducētu daudzus neironu šūnas dažādos reģionos, var būt nozīmīga neiroloģisku slimību ārstēšanai ar lielu neironu zudumu, piemēram, Tay-Sachs, daudziem mukopolisaharidozēm ar neiroloģisku iesaistīšanos un neironu ceroid lipofuscinos.

AAV9 ir plaši novērtēts par spēju šķērsot asins smadzeņu barjeru, un AAV8 nesen ir pierādījis šo spēju.

Mūsu eksperimentos mēs novērojam, ka šī spēja nav tikai sistēmiska līdz CNS virzienam, bet arī no smadzeņu līdz cirkulācijai. Sistēmiskā klātbūtne bija visizteiktākā sirdī, galvenokārt mediēta ar AAV8. AAV8 un -9 klātbūtne tika novērota sirdī un aknās, bet pārsteidzoši, nevis skeleta muskuļos 6. Mēs nenovērojām AAV5 livingocial tauku zudums transdukciju, kas liecina par atšķirībām transporta mašīnās.

Mēs parādām, ka AAV8 ieguva augstākus rezultātus gan transdukcijā, gan svara zudums nasta sadalīšanās profilos MPS IIIB dzīvniekiem, salīdzinot ar citiem serotipiem, kā arī veicināja spēcīgu somatisko un aknu transdukciju.

Mūsu dati liecina, ka AAV8 ir vēlamais kandidāts agrīnai iejaukšanai šīs slimības ārstēšanā, kuras pamatā ir gēnu terapija.

attēli lieko ādu pēc svara zuduma

Tā kā CNS unikālā vide atvieglotu ilgstošu terapeitisko transgēnu izpausmi, ideāls terapeitiskais rezultāts būtu augstas izpausmes izteiksmīga AAV vektora piegāde, kas spēj pārnest daudzus neironu šūnu veidus, izmantojot minimāli invazīvu metodi. Jaunākajos pētījumos AID kapsiju modificētie varianti ir parādījuši lielu potenciālu transdukcijas efektivitātes palielināšanai.

Visi pētījumi ar dzīvniekiem tika veikti saskaņā ar Floridas Universitātes Institucionālās dzīvnieku aprūpes un lietošanas komitejas vadlīnijām. Tika izmantoti trīs līdz seši dzīvnieki uz AAV serotipu. Šis diapazons bija piemērots, pamatojoties uz iepriekšējo līdzīgu pētījumu skaitu citos CNS izplatīšanas modeļos.

  • Augstas šķiedras svara zuduma receptes
  • P2X7 receptors P2X7R ir parādījies kā potenciāla vieta iekaisuma regulēšanā RA, bet maz ir zināms par tās funkcionālo lomu Th17 šūnu diferencēšanā.

No paredzētajiem dzīvniekiem divi AAV5- viens AAV8- viens AAV9- un viens AAVrh10 apstrādāts dzīvnieks uzrādīja vektora ekstrūzijas pierādījumus injekcijas laikā un pēc tam tika izslēgti no analīzes un netiek izmantoti nevienai šīs publikācijas daļai. Jaundzimušie pirms ārstēšanas tika kriogenēti, un pēc apstrādes tie tika ievietoti uz sasilšanas paliktņa, pirms tie tika atgriezti mātēm. Histoloģiskās procedūras Trīs mēnešus pēc apstrādes dzīvnieki tika nogalināti un audi tika iegūti histoloģiskai novērtēšanai.

Sagittālās sērijas sekcijas tika sagrieztas līdz 20 μm biezumam un uzglabātas krioprotektīvā šķīdumā ° C temperatūrā līdz lietošanai. Imunofluorescence Lai noteiktu GFP pozitīvo šūnu fenotipu, audu sekcijas tika inkubētas ar neironu specifisku kodolproteīnu NeuN; neironu marķieriGFAP astrocītu marķieriIba1 mikroglijas marķieri un OSP oligodendrocītu marķieri primārajām antivielām.